利用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠黑色素瘤细胞系MATP基因的初步研究

• 作者: 孔江峰 孙兆增 孙菲 曾林 李丹 李钰 殷慧慧 法云智 王洪宝 董施施
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR-Cas9 黑色素瘤细胞 MATP 研究
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 52-55
• 页数: 4页
• 分类号: R-33
• 字数: 2364字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.04.009

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9系统,敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因,为MATP基因的功能研究奠定基础.方法 利用http://crispr.mit.edu/网站,设计针对MATP的特异性引物,并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体.将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10,利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株.提取不同细胞株的基因组,通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株,并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况.结果 成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株,Western-blot结果表明,该细胞株不表达MATP蛋白.结论 利用pCAS9/gRNA1载体,可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除.