pSilencer 3.1-Sirt3基因RNA干扰表达载体的构建及鉴定

• 作者: 史海龙 曲璇 李军 韩洛川 马晓军
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Sirtuin-3 RNA干扰 载体构建
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 650-653
• 页数: 4页
• 分类号: Q789
• 字数: 3242字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2017.07.003

摘要

目的 构建Sirt3基因的RNA干扰载体,并在真核细胞中进行pSilencer 3.1-Sirt3的功能鉴定. 方法 利用体外DNA合成技术及液相色谱纯化技术合成Sirt3干扰序列,通过酶切将干扰序列连接至pSilencer 3.1载体中,将阳性克隆载体转入感受态大肠杆菌细胞后,筛选阳性克隆,通过第二代体外DNA测序技术进行序列测定.将测序正确的克隆用于Westernblot实验和real time PCR实验,以对其在真核细胞中的正确表达和内源性Sirt3的干涉效果进行鉴定. 结果 PCR扩增得到序列测定结果与干扰序列完全一致.构建的pSilencer 3.1-Sirt3质粒在AGS和SGC-7901细胞中进行基因的转染,pSilencer3.1-Sirt3能够有效抑制内源性Sirt3的mRNA水平和蛋白质水平的表达. 结论 成功构建获得Sirt3干扰载体,并有效降低Sirt3的mRNA和蛋白质水平的表达,为今后Sirt3的功能研究提供良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李军	陕西中医药大学基础医学院生物学教研室	119	494	12.0	17.0
2	韩洛川	陕西中医药大学基础医学院生物学教研室	42	40	3.0	5.0
3	史海龙	陕西中医药大学基础医学院生物学教研室	46	57	5.0	7.0
4	马晓军	陕西中医药大学基础医学院生物学教研室	46	243	8.0	14.0
5	曲璇	陕西中医药大学基础医学院生物学教研室	13	12	2.0	3.0