嗜肺军团菌微滴式数字PCR检测方法的建立

• 作者: 于纪棉 倪健波 李如松 王建峰 高峰 魏姣姣
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜肺军团菌 微滴式数字PCR 实时荧光定量PCR 检测
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1233-1236,1239
• 页数: 5页
• 分类号: R378.99
• 语种: 中文

摘要

目的 建立嗜肺军团菌微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,qPCR)技术进行比较.方法 针对嗜肺军团菌mip基因设计引物和探针,验证其特异性后,用于ddPCR和qPCR.优化ddPCR的退火温度、引物、探针浓度后,比较ddPCR和qPCR灵敏度和重复性,并对模拟样品进行检测.结果 用5株非嗜肺军团菌测试特异性,结果表明具有良好的特异性.ddPCR与qPCR对DNA模板的检测限一致(42.6 fg),模拟样品检出限为300 cfu/ml,ddPCR的线性相关系数(0.999)略优于qPCR(0.982),ddPCR检测的RSD(0.78％ ～ 14.06％)均高于qPCR(0.30％～1.98％).结论 微滴式数字PCR方法灵敏度高、特异性强,可用于嗜肺军团菌检测,且可以对基因进行绝对定量.