肠出血性大肠杆菌z5150毒素基因在细胞黏附过程中的作用

• 作者: 何志利 李崭 李涛 王建新 王慧 谭琳琳 陈芳红
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌 Red重组系统 毒素 RelE 致病性
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 978-982
• 页数: 5页
• 分类号: Q939.93
• 字数: 4870字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2017.12.007

摘要

目的 通过体内过度表达验证z5150基因毒性,利用Red重组系统构建肠出血性大肠杆菌(EHEC)z5150基因缺失突变株并探究其致病力.方法 在菌体内过度表达z5150基因,测定细菌生长曲线验证其毒性.应用PCR技术扩增出含有卡那霉素抗性基因的目的基因上下游同源臂片段,电转入含有pKD46质粒的EHEC中,在阿拉伯糖诱导下使打靶片段重组到基因组.卡那霉素基因的两端包含FRT位点,pFLP2质粒可介导FLP位点专一性重组去除抗性标记.经DNA测序验证目的基因缺失后,通过菌株感染HT29细胞和BALB/c雌鼠检测缺失株细胞黏附能力和毒力的改变.结果与结论 成功构建EHEC△z5150缺失突变株.z5150的缺失不影响细菌的正常生长,但过度表达后明显抑制细菌生长,发挥毒素效应.与野生株相比,EHEC△z5150缺失突变株对肠上皮细胞黏附能力明显增强;小鼠致死率增高,提示其致病力增强.该研究为EHEC基因功能研究提供了基因敲除技术,证明了RelE家族z5150参与EHEC细胞黏附,并增强菌株毒力,为进一步研究EHEC致病机制奠定了基础.