干扰PRMT5表达肝癌细胞稳转细胞株的建立及鉴定

• 作者: 严凌花 孙庆梅 季云 李小琴 李莉 赵婷玲
• 来源期刊: 中国肿瘤外科杂志
• 关键词: 蛋白质精氨酸N-甲基转移酶 RNA 小分子干扰 慢病毒属 载体蛋白质类 蛋白质精氨酸甲基转移酶5
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 临床与基础研究
• 页码范围: 186-190
• 页数: 5页
• 字数: 3080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-4136.2017.03.014

摘要

目的 探讨干扰蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)表达肝癌细胞稳转细胞株的建立及鉴定.方法 针对PRMT5设计出该基因的有效短发夹RNA(shRNA)片段,选择合适慢病毒载体,通过基因工程技术,构建出PRMT5慢病毒载体介导的shRNA重组载体,并通过PCR以及测序检测构建序列的正确性.将重组病毒载体在病毒包装细胞中大量生产后,用病毒原液感染PRMT5表达量相对较高的SMMC-7721、BEL-7402细胞,2d后,用最低杀死浓度的嘌呤霉素进行筛选,得到克隆样生长的细胞,扩大培养后分别提取蛋白和RNA,Western印迹和qPCR检测PRMT5的表达.结果 成功构建出由人源性PRMT5慢病毒载体介导的shRNA重组载体pLKO.1-sh-PRMT5,PCR及测序均证明构建序列的正确.Western印迹法和qPCR检测,pLKO.1-sh-PRMT5干扰组的PRMT5蛋白及mRNA水平明显低于pLKO.1-sh-GFP组(P＜0.05),pLKO.1-sh-PRMT5载体具有良好的干扰效果.结论 运用慢病毒感染并筛选出稳转细胞株,在干扰效率及经济角度均优越于瞬时转染,为今后研究PRMT5在肝癌细胞中作用功能提供了良好的科研工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李小琴	江苏大学附属医院肿瘤治疗中心化疗科	25	65	5.0	6.0
2	季云	江苏大学附属医院肿瘤治疗中心化疗科	6	26	3.0	5.0
3	赵婷玲	江苏大学附属医院肿瘤治疗中心化疗科	8	45	4.0	6.0
4	孙庆梅	江苏大学附属医院肿瘤治疗中心化疗科	7	25	3.0	5.0
5	严凌花	江苏大学附属医院肿瘤治疗中心化疗科	16	80	5.0	8.0
6	李莉	江苏大学附属医院肿瘤治疗中心化疗科	34	139	7.0	11.0