猪FAM213B基因mRNA和启动子的克隆及序列分析

• 作者: 卢孝璋 孙显月 张爱玲 张豪 李加琪
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 FAM213B基因 转录 启动子 克隆 子宫内膜细胞 硫氧还蛋白
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: S828
• 字数: 5904字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2017.03.001

摘要

[目的]获得猪FAM213B基因完整mRNA和启动子序列,研究猪FAM213B基因表达,为探讨母猪妊娠的建立和胚胎发育调控机制奠定基础.[方法]通过5′RACE和3′RACE技术,获得基因完整mRNA序列,分析不同物种该基因氨基酸序列相似性;通过PCR克隆启动子区,并通过双荧光素酶报告基因载体系统转染猪子宫内膜细胞,研究其转录活性.[结果]猪FAM213B基因mRNA全长808 bp,其中5′UTR、CDS区和3′UTR长度分别为67、 609(含终止密码子)和132 bp(不含poly A序列),在17~106位氨基酸之间存在硫氧还蛋白折叠结构域;与猪FAM213B基因其他2个潜在转录本相比,三者都包含硫氧还蛋白折叠结构域,但蛋白三级结构存在较大差异;猪FAM213B氨基酸序列与山羊、牛和绵羊高度相似,相似性分别为94.03%、 93.03%和91.54%.克隆获得2 261 bp(-2 231/+30)的基因启动子序列,将其连接至双荧光素酶报告基因载体,转染猪子宫内膜细胞,发现获得的启动子片段能够启动下游报告基因的转录,在启动子区存在潜在的典型NFκB等转录因子结合位点.[结论]本研究获得猪FAM213B基因转录本长度为808 bp,其蛋白存在硫氧还蛋白折叠功能结构域,其启动子序列(-2 231/+30)在猪子宫内膜细胞中具有较强的转录活性.