泛素特异性蛋白酶2a的表达及催化机制

• 作者: 张万方
• 来源期刊: 西北大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 泛素特异性蛋白酶2 酶活性分析 Ub-AMC Di-Ub
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 561-567
• 页数: 7页
• 分类号: R362
• 字数: 3941字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16152/j.cnki.xdxbzr.2017-08-015

摘要

研究USP2a在肿瘤发生发展中的催化机制,设计引物对USP2a的关键氨基酸残基Asn218,Cys223,His464和Asn482进行点突变,分析突变后对USP2a催化活性以及底物特异性的影响.利用荧光检测方法测定USP2a-WT和USP2a-Ms的酶促动力常数,并采用LC-MS/MS与SDS-PAGE方法分析USP2a-WT和USP2a-Ms的异肽酶活性,获得了可溶性表达的USP2a-WT和USP2a-Ms重组蛋白.结果表明,氨基酸残基Cys223和His464突变后酶失去活性,其余突变体分解底物Ub-AMC的催化效率与野生型无显著差异,氨基酸残基Asn218和Asn482单独突变后对酶活性没有显著影响,但双突变体USP2a-N218 A/D482A则显著降低酶活性.USP2a的氨基酸残基Cys223和His464直接参与酶的催化反应;氨基酸残基Asn218和Asn482可能通过形成Asn218-Asn482电子对在催化过程中起到稳定氨基酸残基His464的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张万方	新乡学院生命科学技术学院	3	2	1.0	1.0