人S100A8和S100A9原核载体的构建、鉴定及蛋白纯化

• 作者: 丁高峰 徐文才 蒋月 郭雷鸣 陆寓非 陈淅涓
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 关键词: 钙粒蛋白A 钙粒蛋白B 基因表达
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 520-525
• 页数: 6页
• 字数: 4607字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2017.06.005

摘要

目的 分别构建人S100A8(hS100A8)和S100A9(hS100A9)的PET-28a原核表达载体,并纯化hS100A8和hS100A9蛋白,为进一步研究hS100A8和hS100A9蛋白的分子生物学功能奠定实验基础.方法 用带酶切位点的引物从hS100A8和hS100A9的真核表达载体扩增hS100A8和hS100A9基因片段,用相同的限制性内切酶双酶切PCR产物和pET-28a质粒.将两者用T4连接酶连接后转化入感受态细胞DH5α,提取质粒进行鉴定.将构建成功的pET28a-hS100A8和pET28a-hS100A9分别转化感受态细胞BL21,诱导蛋白表达,将等量纯化蛋白在一定钙离子浓度下室温孵育30 min,通过SDS-PAGE和Western blot验证异源二聚体是否形成.结果 正确扩增出hS100A8和hS100A9基因,重组质粒pET28a-hS100A8和pET28a-hS100A9构建成功,纯化后在室温孵育后可形成异源二聚体.结论 hS100A8和hS100A9蛋白可以在体外形成异源二聚体,为探讨其生物学作用奠定理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭雷鸣	郑州大学附属肿瘤医院放疗科	7	37	4.0	6.0
2	丁高峰	郑州大学附属肿瘤医院放疗科	5	21	2.0	4.0
3	徐文才	郑州大学附属肿瘤医院放疗科	3	20	2.0	3.0
4	陈淅涓	郑州大学附属肿瘤医院放疗科	13	65	4.0	7.0
5	蒋月	郑州大学附属肿瘤医院放疗科	10	40	4.0	6.0
6	陆寓非	郑州大学附属肿瘤医院放疗科	9	46	4.0	6.0