鼠抗人S100 A9天然蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘文第 孙向东 宋军营 张振强 张改平 张钟允 段睿 米丹阳 袁永 闫敏
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞 S100A9 单克隆抗体 免疫学特性
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1485-1490
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 5681字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.10.017

摘要

目的：：探索以白细胞为免疫原的鼠抗人白细胞天然蛋白单克隆抗体( monoclonal antibodies,mAbs)制备与克隆筛选鉴定方法,制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法：用健康人外周血白细胞免疫小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备mAbs,通过免疫细胞化学法对杂交瘤细胞进行非特异性阳性筛选,有限稀释法进行亚克隆,应用免疫沉淀-质谱法进行mAb特异性鉴定,通过Western blot进行细胞株筛选,小鼠体内诱生腹水法制备单抗,亲和层析法纯化, ELISA间接法测定效价及亲和力,Western blot进行特异性鉴定及交叉反应性分析,免疫组化染色人乳腺癌石蜡切片。结果：获得免疫细胞化学检测阳性多克隆细胞35孔,分泌鼠抗人S100A9蛋白单克隆抗体细胞株11株,优选1株制备腹水并纯化鉴定抗体,抗体效价为1∶3.18×105,亚类为IgG1,轻链为kappa链,抗体纯度达95%以上,亲和力常数3.54×108 L/mol,与S100A8的交叉反应率为0.12%,与S100A12和S100A13几乎无交叉反应,组化染色识别人乳腺癌组织中的S100A9蛋白。结论：成功制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,该单抗具有高效价、较高亲和力和高特异性,能为其应用于免疫组化检测S100A9蛋白的表达提供依据。