人源极光激酶A在毕赤酵母和MCF-7细胞中的表达及纯化

• 作者: 于丽娜 于洋 施维 王福启 谢萍 麻薇
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人源激光激酶A 毕赤酵母X33 MCF-7细胞 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 266-270
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 2812字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20170211

摘要

目的:构建人源极光激酶A(AURKA)真核表达载体,检测其在毕赤酵母X33和MCF-7细胞中的表达及纯化.方法:将双酶切PCR扩增的目的基因与真核表达载体连接,构建重组质粒.电转法转染重组质粒,筛选后采用SDS-PAGE和Western blotting法检测AURKA蛋白的表达,Ni-NTA柱法纯化表达的蛋白;放射自显影法检测AURKA的生物活性;细胞计数法检测转染重组质粒后MCF-7细胞增殖情况.结果:2种重组质粒经PCR均扩增出1 212 bp目的基因,表明真核表达载体构建成功.重组AURKA蛋白相对分子质量约为50 000,且可磷酸化其底物组蛋白H3,表明重组AURKA具有活性.与转染空质粒和野生型MCF-7细胞比较,转染AURKA 24 和48 h后MCF-7活细胞数量明显增加.结论:AURKA在毕赤酵母和MCF-7细胞中成功表达和纯化,且其过表达可促进细胞增殖.