肇东盐单胞菌中胞苷酸激酶基因cmk的克隆与功能分析

• 作者: 刘艳双 姜巨全 孙开福 杨立娜
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 肇东盐单胞菌 胞苷酸激酶(CMK) 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 33-40
• 页数: 8页
• 分类号: Q933
• 字数: 5401字
• 语种: 中文

摘要

为探究一株中度嗜盐菌一肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)NEAU-ST10-25T的耐盐碱机制,采用基因文库筛选方法从该菌株获得一个重组质粒pUC-LYS1.该质粒可恢复大肠杆菌(Escherichia coli Na+/H+逆向转运蛋白缺陷株KNabc在含有0.2 mol·L-1 NaC1的LBK培养基上生长.序列分析显示,重组质粒pUC-LYS1中外源DNA片段由1个N端截短的ORF1、三个完整的ORF(ORF2-4)以及1个C端截短的ORF5组成.其中,ORF4与伸长盐单胞菌(Halomonas enlongata)中1个推测的胞苷酸激酶(Cytidylate kinase,CMK)同源性最高(86％).为便于区分与其同源物,编码ORF4的基因cmk来自肇东盐单胞菌(Halomonas zhaodongensis)被定名为Hz_cmk.Hz_CMK也与包括已被鉴定来自大肠杆菌(E.coli)的Ec_CMK等其他同源物具有较高同源性.为进一步鉴定Hz_cmk是否编码胞苷酸激酶,通过PCR扩增分别将Hz_cmk和大肠杆菌(E.coli)的同源基因Ec_cmk(作为正对照)构建至原核表达载体pET19,转化到大肠杆菌(E.coli)C41(DE3)感受态细胞中诱导表达.SDS-PAGE表明其以可溶形式存在.酶学分析表明Hz_CMK与Ec_CMK均具有较高胞苷酸激酶活性.为国内外首次中度嗜盐菌的胞苷酸激酶基因功能鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜巨全	东北农业大学生命科学学院	9	9	2.0	3.0
2	孙开福	东北农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
3	杨立娜	东北农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
4	刘艳双	东北农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0