诱导性表达人巨细胞病毒UL138蛋白的胃癌细胞株构建及其效应评价

• 作者: 叶璐璐 孙祥威 张良 沈贤 胡畅远 薛向阳 郭刚强 金劲激 陈文静
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 巨细胞病毒 UL138 Tet-on系统 胃肿瘤 基因,肿瘤抑制
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 79-84
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 字数: 4714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2017.02.001

摘要

目的:构建可诱导表达人巨细胞病毒(HCMV)UL138蛋白的稳定遗传胃癌细胞系,并评价UL138对胃癌细胞的生物学效应.方法:将pCMV-tet3G质粒转染BGC-823胃癌细胞,通过G418及荧光素酶活性检测筛选BGCTet-on细胞株.再将含有UL138外源基因的pTRE3G-UL138质粒转染稳定BGCTet-on细胞株,通过G418及潮霉素双抗筛选,获得诱导性表达UL138基因的胃癌细胞(BGC-UL138Tet-on).强力霉素(DOX)诱导后,采用Western blot验证UL138蛋白表达,采用流式细胞术及CCK8试剂盒检测UL138蛋白表达对胃癌细胞的生长周期及增殖的影响.构建荷瘤裸鼠模型,体内验证UL138蛋白表达对胃癌细胞增殖的影响.结果:成功构建了DOX诱导性表达的、携带UL138基因的BGC-UL138Tet-on稳转细胞株.UL138蛋白表达可显著抑制胃癌细胞增殖;流式细胞术检测显示UL138蛋白表达阻滞BGC-823细胞周期在G1期.荷瘤裸鼠模型体内实验发现,DOX腹腔注射诱导UL138蛋白表达后,BGC-UL138Tet-on移植瘤体积缩小甚至消失.结论:成功构建可诱导表达UL138蛋白的胃癌细胞株,进一步证实HCMV基因UL138的表达可在体内和体外抑制胃癌细胞的增殖,细胞实验提示细胞周期阻断在G1期.