稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23细胞系建立及其功能研究

• 作者: 员月明 周天鸿 宫君原 张欣 李弘剑 李月琴 杨丹丽 肖小平 邹弈
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 巨细胞病毒 基因,UL23 逆转录病毒
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 966-970
• 分类号: R363
• 字数: 4094字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2010.05.027

摘要

目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据.方法:通过PCR 技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23 基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23.将该载体导入AmphoPackTM-293 细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418 抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系.采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位.结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白.共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23 定位于细胞质,处于细胞核周边.结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系.该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程.