miR-216b在体外培养细胞中加速长非编码RNA UCA1的降解

• 作者: 丁红梅 夏伟 李少华 李慧 李洁 李达 白琛俊 耿介 董洁 邵宁生 郑伟 郭晓华 黄皑雪
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: UCA1 长非编码RNA miR-216b 降解
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 227-232
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.001

摘要

目的:探讨长非编码RNA(lncRNA)UCA1作为miR216b的“分子海绵”结合miR-216b后的命运变化.方法:提取人HEK293T细胞基因组,以特异性引物PCR扩增UCA1基因并克隆至pcDNA6.0b载体,用氨苄西林抗性筛选阳性克隆,重组质粒pcDNA6-UCA1转染HEK293T和HeLa细胞并鉴定其表达水平.向HEK293T和HeLa细胞转染miR-216b类似物,同时用放线菌素D抑制细胞转录,收取3个时间点的细胞总RNA并鉴定其完整性,反转录获得cDNA后,采用实时荧光定量PCR技术检测各时间点UCA1的水平,测定其半衰期.pcDNA6-UCA1转染细胞24 h后,转染miR-216b类似物或miR-216b抑制剂,并使用放线菌素D抑制转录,收取3个时间点的细胞总RNA,qRT-PCR检测UCA1半衰期.结果:构建的pcDNA6-UCA1过表达质粒转入HEK293T细胞后,qRT-PCR检测UCA1表达水平显著提高;miR-216b能够降低细胞内源或外源过表达的UCA1稳定性,加速UCA1的降解,显著缩短其半衰期;使用miR-216b的抑制剂,UCA1的半衰期延长.结论:miR-216b能够加速lncRNA-UCA1的降解,为研究miRNA与lncRNA的相互作用提供了新的思路.