人β-防御素3与结缔组织生长因子共表达重组慢病毒载体的构建及表达

• 作者: 刘东华 刘翠 刘静 孙洁 张欣然 郭希民 郭红延 钱智勇
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 重组慢病毒 人β-防御素3 结缔组织生长因子 骨髓间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 38-42
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R373
• 字数: 3740字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2017.01.009

摘要

目的：体外构建共表达人β-防御素3（hBD3）与结缔组织生长因子（CTGF）的重组慢病毒，并检测其对骨髓间充质干细胞（BMSC）的转染效率及表达情况。方法体外构建携带hBD3、CTGF和增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的重组慢病毒表达载体，测定病毒滴度。转染BMSC，确定最适感染倍数（MOI）值。采用荧光显微镜和流式细胞仪检测病毒的转染效率及传代稳定性。 Western印迹检测目的蛋白的表达。结果经PCR和测序分析鉴定，成功构建了携带hBD3和CTGF基因的重组慢病毒载体Lenti-CTGF-hBD3-EGFP、Lenti-hBD3-EGFP和Lenti-EGFP，检测病毒滴度分别为3．21×108、5．80×108和1．16×109。病毒转染BMSC最适MOI值为150。荧光显微镜下，转染后BMSC绿色荧光效率高；流式细胞仪检测病毒的转染效率，Lenti-CTGF-hBD3-EGFP为79．72％，Lenti-hBD3-EGFP为83．08％，Lenti-EGFP为84．43％，且都稳定遗传。 Western印迹显示目的蛋白表达成功。结论成功构建了共表达hBD3、CTGF的重组慢病毒载体，并能在BMSC中高效、稳定表达，为进一步研究hBD3与CTGF的应用奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭希民	军事医学科学院基础医学研究所	37	163	6.0	11.0
2	刘东华	军事医学科学院基础医学研究所	6	8	2.0	2.0
3	郭红延	北京武警总医院口腔医学中心	9	20	3.0	4.0
4	钱智勇	军事医学科学院基础医学研究所	5	11	2.0	3.0
5	刘翠	北京武警总医院口腔医学中心	4	7	1.0	2.0
6	刘静	北京武警总医院口腔医学中心	3	3	1.0	1.0
7	孙洁	北京武警总医院口腔医学中心	2	3	1.0	1.0
8	张欣然	北京武警总医院口腔医学中心	4	8	1.0	2.0