鼠疫耶尔森菌基因组无痕修饰方法的建立

• 作者: 吕瑞辰 吴海莲 宋亚军 宋凯 王敏 祁芝珍 肖丽生 赵海红 陈荣
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 鼠疫菌 同源重组 基因编辑
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 209-212,221
• 页数: 5页
• 分类号: Q-33
• 字数: 4364字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2017.03.011

摘要

目的 构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)中基因组无痕修饰的技术平台,深入研究鼠疫菌相关基因的功能及作用机制.方法 通过不对称PCR扩增抗性盒片段(含修饰靶标区域上下游同源臂),将其导入含pKD46质粒的鼠疫菌中.在阿拉伯糖的诱导下,pKD46质粒可表达与同源重组相关的3个酶(Exo, Beta和Gam蛋白),诱导重组后再导入pKSI-1质粒与目的基因的重组载体,与抗性盒进行第二次同源重组.通过加入阿拉伯糖和IPTG诱导pREDTKI表达重组酶和I-SceⅠ酶,可对未发生重组的抗性盒片段和pKSI-1质粒上的I-SceⅠ位点酶切,从而起到消除抗性盒与质粒作用,达到无痕修饰的目的.结果与结论 成功构建了鼠疫菌的ΔwaaA和waaA(△9nt)两个突变株.根据不同的实验目的选择相应的基因敲除方法,得到的无痕修饰菌株为鼠疫菌相关基因的功能研究奠定了基础.