水貂PMEL基因启动子活性及转录调控元件分析

• 作者: 彭永东 李丽莎 李兰会 李祥龙
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 前黑素小体蛋白基因(PMEL) 启动子 瞬时表达 点突变 Sp1结合位点
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 911-920
• 页数: 10页
• 分类号: S829.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.06.006

摘要

貂皮颜色是水貂皮重要的质量性状,也是影响其价格的重要因素,前黑素小体蛋白基因(premelanosome protein gene,PMEL)作为影响动物被毛颜色变异的重要候选基因,近年来得到广泛重视.本研究旨在筛选调控水貂(Mustela vison)毛色基因PMEL启动子活性区域及转录因子结合位点,为探究该基因的表达调控机制提供理论依据,并为彩色水貂的育种和改良提供思路.以与水貂同源性较高的雪貂(M.putorius furo)PMEL基因序列(GenBank:NW_004569320.1)为参考进行引物设计,以黑色水貂毛皮基因组DNA为模板扩增PMEL基因启动子片段并克隆到pMD19载体,通过PCR和测序鉴定为阳性克隆,利用限制性内切酶Kpn Ⅰ和HindⅢ对阳性质粒和pGL3-Basic载体同时进行双酶切,胶回收酶切产物,将二者的酶切产物通过T4连接酶连接成环状质粒,再利用PCR、双酶切和测序鉴定为阳性克隆,然后提取无内毒素质粒,利用lip2000脂质体转染到A375细胞和293T细胞,通过双荧光素酶检测系统测定相对荧光素酶活性值,并对核心启动子区的转录因子结合位点进行预测及活性验证.成功构建了6个不同长度的启动子片段,水貂PMEL基因-671/+87为核心启动子区域,从-671缺失到-477时启动子活性由最高降低到最低,表明在-671/-477可能存在正调控元件增强其启动活性.利用生物信息学软件分析该区域的转录因子结合位点,提示有十几种转录因子结合位点的存在,综合至少2个软件的预测结果,选择出Sp1 (-516/-506)、Sp1(-505/-495)和Sp1(-499/-489)结合位点,对其分别构建了3个Sp1突变体,检测结果表明,-516/-506、-505/-495和-499/-489为转录的正调控区域.确定了水貂PMEL基因启动子核心区域-671/+87,预测的3个Sp1结合位点为水貂PMEL基因转录的正调控区域.本研究结果为了解水貂PMEL基因的生物学功能提供了重要信息,为进一步研究其调控水貂被毛颜色分子遗传机制提供新的理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兰会	河北农业大学动物科技学院	120	583	13.0	17.0
2	李祥龙	河北科技师范学院动物科技学院	65	311	9.0	14.0
6	李丽莎	河北科技师范学院动物科技学院	14	71	5.0	7.0
8	彭永东	河北科技师范学院动物科技学院	23	38	3.0	5.0