小鼠11β-HSD1基因真核表达载体的构建及应用

• 作者: 叶磊 杨可 沈亚非 辛婧 邓飞
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 11β-HSD1基因 真核表达载体 前体脂肪细胞 肥胖
• 年，卷（期）: 2017,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究·论著
• 页码范围: 12-17
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 3607字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2017.16.003

摘要

目的 构建小鼠11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD1)基因的慢病毒真核表达载体PLJM1-11β-HSD1-GFP,建立小鼠前体脂肪细胞(3T3-L1)高表达11β-HSD1基因的稳定感染细胞株,为11β-HSD1基因的功能研究奠定基础.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从小鼠肝脏cDNA中扩增11β-HSD1开放阅读框ORF,构建针对11β-HSD1基因的真核表达载体,转化感受态DH5α菌株,抽提质粒并进行测序鉴定.用测序成功的质粒和慢病毒包装质粒共同转染293T细胞,产生慢病毒并转染3T3-L1细胞.根据绿色荧光效率挑取单克隆细胞团筛选出稳定细胞株,通过Western blot鉴定PLJM1-11β-HSD1-GFP转染成功.结果 经酶切、PCR及测序验证,PLJM1-11β-HSD1-GFP真核表达载体构建成功,并包装慢病毒,绿色荧光效率90%以上,并利用其慢病毒悬液成功感染3T3-L1细胞,筛选出的稳定感染细胞株的3T3-L1细胞成功高表达11β-HSD1蛋白.结论 成功构建了11β-HSD1基因的真核表达载体,并建立高表达11β-HSD1的稳定感染细胞株PLJM1-11β-HSD1-GFP-3T3-L1,为进一步研究11β-HSD1基因的功能,特别是在肥胖中的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶磊	河南省漯河市召陵区人民医院神经内科	1	1	1.0	1.0