酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路初步研究

• 作者: 刘骄 张曼 杨银凤 王云鹤 田巧珍 金鑫
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: β-防御素-1 瘤胃上皮细胞 酿酒酵母菌 抑制剂 信号通路 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 561-569
• 页数: 9页
• 分类号: S852.4
• 字数: 5320字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.03.021

摘要

文章旨在探索核因子-κB (NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路是否介导益生性酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(RECs)β-防御素-1(SBD-1)基因的转录.首先建立绵羊RECs培养体系作为体外试验模型,选用诱导SBD-1转录最高的菌液浓度和诱导培养时间进行信号通路初步研究,采用实时荧光定量逆转录PCR (RT-qPCR)对已建立的诱导SBD-1转录模型中的细胞膜受体——Toll样受体2(TLR2)、信号衔接蛋白——髓样分化因子(MyD88)以及NF-κB和MAPKs通路中的相关因子基因转录变化进行检测;然后选用NF-κB和MAPKs通路中的4种特异性抑制剂(即NF-κB通路特异性抑制剂PDTC、P38通路特异性抑制剂SB202190、ERK 1/2通路特异性抑制剂PD98059、JNK通路特异性抑制剂SP600125)通过单独或相互组合处理细胞后再进行诱导培养,同时采用RT-qPCR的方法检测用抑制剂处理绵羊RECs后SBD-1 mRNA的转录水平.结果表明:酿酒酵母菌刺激RECs后,NF-κB和MAPKs通路中各因子NF-κB、P38、JNK、ERK1/2、细胞膜受体TLR2与信号衔接蛋白MyD88的mRNA水平与未刺激组相比均有所升高,且呈显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);通过单独或组合添加抑制剂后再诱导,均发现特异性抑制剂PDTC、SB202190、SP600125、PD98059可极显著抑制酿酒酵母菌对RECs SBD-1的上调作用(P＜0.01),且P38通路特异性抑制剂SB202190的抑制效果最明显.结果提示,酿酒酵母菌诱导绵羊RECs SBD-1的转录可能与TLR2-MyD88-NF-κB/MAPKs通路有关,但以TLR2-MyD88-MAPKs中的TLR2-MyD88 P38通路为主要的信号通路.