香菇C91-3转录本Unigene1245基因的克隆表达及其抗肿瘤活性

• 作者: 张伟 李星云 栾杭琪 沙丽 王晓丽 王钰 邵立群 钟民涛 黄敏
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 香菇C91-3 克隆 诱导表达 抗肿瘤
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 884-887
• 页数: 4页
• 分类号: R730.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201708004

摘要

目的 克隆香菇C91-3转录本中Unigene1245基因并进行生物信息学分析,研究其编码蛋白的抗肿瘤活性.方法 提取香菇C91-3菌丝体总RNA,反转录合成cDNA,经RACE技术获得Unigene1245基因编码序列,通过NCBI对其进行生物信息学分析.设计特异性引物进行PCR扩增,将其克隆到载体pET-32a(+)上,将重组表达质粒热转化至E.coli Rosetta-gami (DE3)中,进行目的蛋白的诱导表达、纯化及复性,通过CCK-8法检测其抗肿瘤活性.结果 香菇C91-3转录本Unigene1245基因为YjgF/YER057c/UK114家族成员,成功诱导表达其编码蛋白,CCK-8法结果显示该蛋白对人肝癌HepG2细胞的增殖具有一定抑制作用,且具有一定的时间及浓度依赖性.结论 成功克隆并诱导表达Unigene1245基因,并鉴定其具有抑制HepG2细胞增殖的能力,为后续探究抗肿瘤机制奠定了基础.