猪圆环病毒2型ORF2单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 安春敬 张华伟 李祥敏 莫红芳 赵晓玲 赵泽凯 郭夏阳 钱平
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 核衣壳蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 32-37
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4|S852.659.2
• 字数: 4138字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2017.10.006

摘要

以杆状病毒表达系统表达PCV2ORF2重组蛋白为免疫原,旨在获得针对PCV2的特异性单克隆抗体.用Sf9细胞表达PCV2ORF2重组蛋白,通过层析柱和超滤管浓缩法纯化PCV2ORF2重组蛋白.将纯化的PCV2ORF2重组蛋白免疫6周龄的雌性Balb/c小鼠,3次免疫后,取免疫后小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA筛选,经过3次亚克隆获得4株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1H9、4C11、5B8和4F12株.IFA和Western b1ot试验说明,4株杂交瘤细胞分泌的抗体能与ORF2重组蛋白作用.特异性试验表明,4F12株单克隆抗体与猪圆环病毒2型(PCV2 KQ22株)发生特异性反应,经抗体亚型鉴定1H9、4C11和5B8 3株亚型为IgG1/Kappa,4F12株为IgG2b/Kappa,1H9、4C11、5B8和4F12株小鼠腹水效价分别为105、104、106和105.表明获得了与PCV2特异性作用的单克隆抗体.