pGV141-ROCK2真核表达载体的构建及其在血管内皮细胞中的表达

• 作者: 孙喜庆 张丽君 徐沁 李程飞 王永春 石菲 褚孟洋 赵疆东 闫铭 高原
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒 载体 内皮细胞 Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 专题研究2
• 页码范围: 635-638
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 2758字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2017.06.005

摘要

目的:克隆人Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)基因,构建pGV141-ROCK2真核表达载体,并观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)中的表达.方法:以RT-PCR的方法获得ROCK2基因的CDS区,经XhoI、KpnI双酶切后,连接到pGV141载体中;将构建的pGV141-ROCK2真核表达载体,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将其转染入HUVEC-C中;采用western blot法检测转染后HUVEC-C中ROCK2蛋白的表达情况.结果:PCR法、双酶切法检测到的目标条带与目的条带大小一致,测序结果显示重组质粒中插入的ROCK2基因序列与GenBank编码上的编码区完全一致;与未转染重组质粒的HUVEC-C比较,转染pGV141-ROCK2载体的HUVECC中ROCK2蛋白的表达显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建pGV141-ROCK2真核表达载体,体外转染人HUVEC-C后可使ROCK2蛋白表达显著增加.