一种利用CRISPR/Cas9对细胞添加生物条形码的新方法

• 作者: 周昌阳 李艳利 魏喻
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 生物条形码 CRISPR/Cas9 细胞标记
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 40-45
• 页数: 6页
• 字数: 3778字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0087

摘要

旨在利用CRISPR/Cas9对细胞添加不同的生物条形码(Barcode),实现对细胞进行不同的标记.将生物条形码序列、条件诱导性Cas9序列及相应的sgRNA序列通过PB酶整合到细胞中,诱导Cas9表达之后对生物条形码序列测序分析细胞的标记情况.所设计的生物条形码含有6个相互重叠的sgRNA识别位点,这种设计可以使条形码序列只会被Cas9切割一次.结果显示,所设计的生物条形码序列在N2a细胞中经Dox诱导之后能够高效地被Cas9切割,所挑的9个克隆中,生物条形码序列有9种不同的基因型.含有受loxp-stop-loxp调控表达Cas9的序列及生物条形码序列的E14胚胎干细胞经Cre诱导之后,挑单克隆测序分析显示,21株细胞中仅2株单克隆细胞生物条形码保持原来的基因型,另外19株有18种不同的基因型.成功建立了可进行时空调控地在细胞内高效添加特异且相对稳定的生物条形码标记的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李艳利	上海大学生命科学学院	7	11	1.0	3.0
2	魏喻	上海大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
3	周昌阳		1	0	0.0	0.0