针对糖尿病易感基因Vβ13的慢病毒系统的建立及其对T细胞的转导

• 作者: 刘志军 尹凌轩 张曼 李娇 李文通 杜宇 王金冬
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 1型糖尿病 慢病毒 绿色荧光蛋白 红色荧光质粒 Vβ13
• 年，卷（期）: 2017,（z2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 8-12
• 页数: 5页
• 字数: 2376字
• 语种: 中文

摘要

目的 应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效沉默连接红色荧光蛋白mCherry与靶基因1型糖尿病易感基因Vβ13的表达,建立一种简便有效基因沉默的系统,并初步研究慢病毒感染T细胞的可能性.方法 以Vβ13 mRNA编码序列作为干扰靶点,以慢病毒质粒UTG作为载体,构建靶向Vβ13的shRNA表达质粒,构建携带Vβ13的mCherry红色荧光蛋白的质粒作为验证shRNA有效性的靶点,并转染293FT细胞.通过红色荧光的表达及RT-PCR和Western blot确定最佳沉默Vβ13序列后,将有效的UTG-Vβ13质粒与辅助质粒共转染293FT细胞,低温超高速离心,获取高滴度慢病毒.应用慢病毒感染大鼠T细胞,光镜观察T细胞被慢病毒感染的情况,流式细胞术检测T细胞的绿色荧光表达情况.结果 成功构建Vβ13-shRNA慢病毒载体UTG-shRNA-Vβ13,RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染的293FT细胞Vβ13 mRNA及蛋白表达相对于对照组显著降低.构建的慢病毒可以成功感染T细胞.结论 红色靶基因-绿色慢病毒系统具有简便的筛选性能;UTG慢病毒对神经干细胞具有较高感染效率.可作为一种良好的基因导入载体,实现慢病毒介导的RNA干扰在T细胞内的有效表达,并为T细胞过继性转移的相关研究提供技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文通	潍坊医学院病理学教研室	49	177	8.0	9.0
2	杜宇	潍坊医学院病原生物学教研室	5	2	1.0	1.0
3	李娇	潍坊医学院生物科学与技术学院	2	1	1.0	1.0
4	张曼	潍坊医学院病原生物学教研室	3	1	1.0	1.0
5	刘志军	潍坊医学院病原生物学教研室	15	19	2.0	4.0
6	王金冬	潍坊医学院病原生物学教研室	7	10	2.0	2.0
7	尹凌轩	潍坊医学院病原生物学教研室	1	1	1.0	1.0