中华按蚊谷胱甘肽-S-转移酶E6(AsGSTE6)的表达纯化与结晶

• 作者: 张甜甜 苗娅 许柏英 陈斌
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 中华按蚊 谷胱甘肽-S-转移酶 AsGSTE6 原核表达 纯化 结晶
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 59-67
• 页数: 9页
• 分类号: Q966
• 字数: 7502字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2018.01.007

摘要

[目的]对中华按蚊Anopheles sinensis谷胱甘肽-S-转移酶E6(AsGSTE6)进行初步晶体学研究,为深入研究其空间结构奠定基础.[方法]利用生物信息学软件,首先对中华按蚊AsGSTE6进行生物信息学预测和分析;然后进行分子克隆,构建重组子pET28 a-AsGSTe6;利用大肠杆菌Escherichia coli原核表达系统进行诱导表达;采用Ni-NTA金属螯合层析和葡聚糖凝胶层析的方法对重组蛋白进行纯化;通过葡聚糖凝胶层析和化学交联的结果分析蛋白的聚合状态;运用坐滴蒸气扩散法对重组蛋白进行结晶筛选.[结果]生物信息学分析结果表明,AsGSTE6分子量为25.28 kD,无信号肽和跨膜区,是亲水性蛋白;三级结构预测结果显示,AsGSTE6主要由一个小的βαβαββα折叠模式的N端结构域和一个大的全螺旋的C端结构域组成.多重序列比对结果表明,在不同昆虫中GSTE6具有高度保守性.分子克隆得到中华按蚊AsGSTE6的编码基因AsGSTe6序列,大小为672 bp.在大肠杆菌中AsGSTE6主要在上清中有大量表达,为可溶性表达;通过镍柱亲和层析和凝胶过滤层析纯化出了高纯度且稳定的AsGSTE6重组蛋白;凝胶过滤层析结合化学交联的结果证实体外纯化的融合蛋白AsGSTE6主要呈二聚体状态;通过晶体筛选获得了AsGSTE6的晶体.[结论]运用结晶学的方法获得了AsGSTE6的晶体,这为后续解析AsGSTE6的三维结构奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈斌	重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所媒介昆虫重庆市重点实验室	73	290	9.0	15.0
2	许柏英	重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所媒介昆虫重庆市重点实验室	8	10	2.0	2.0
3	张甜甜	重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所媒介昆虫重庆市重点实验室	4	7	2.0	2.0
4	苗娅	重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所媒介昆虫重庆市重点实验室	3	4	1.0	1.0