布鲁菌分泌蛋白BspE原核表达、反应原性及功能初步研究

• 作者: 印双红 张俊波 张欢 张红 易继海 李志强 石秀兰 陈创夫
• 来源期刊: 中华地方病学杂志
• 关键词: 布鲁杆菌属 BspE基因 原核表达 炎症因子
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 689-694
• 页数: 6页
• 字数: 4119字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-4255.2018.09.001

摘要

目的 观察布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspE的原核表达、免疫反应原性,以及重组蛋白BspE对细胞因子的影响.方法 根据GenBank中公布的羊种布鲁菌M5-90的BspE基因,合成基因片段,将其连接到PUC57载体测序,将测序正确的基因序列克隆到原核表达载体pET-28α上,转化入大肠埃希菌DE3感受态细胞中诱导表达,Ni-NTA亲和柱纯化目的蛋白,蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析其反应原性.25 g/LBspE重组蛋白作用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,对照组采用相同含量的牛血清白蛋白(BSA)替代BspE,作用12、24、48 h,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(IL)-1β水平.结果 成功获得pET-28α-BspE重组表达质粒;Western blot结果显示,出现相对分子质量约为30.1×103的条带,纯化后条带单一,BspE重组蛋白具有较好的反应原性.与BSA组比较,BspE蛋白可显著提高IL-1β (ng/L)的水平(12h:4327±213比30.24±1.66、24 h:57.78±3.44比41.22±1.22、48 h:72.52±3.04比46.77±2.75,t=8.38、7.86、10.89,P均＜0.05).结论 BspE原核表达后具有较好的免疫反应原性,并可提高小鼠巨噬细胞IL-1β的表达水平,为效应蛋白在布鲁菌致病机制中作用的研究提供科学依据.