金黄色葡萄球菌脱水鲨烯脱氢酶(CrtN)和DNA结合蛋白Sso7d的融合表达

• 作者: 刘卫东 贾士儒 赵元蕾 郑迎迎 郭瑞庭
• 来源期刊: 天津科技大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 脱水鲨烯脱氢酶 DNA结合蛋白 金黄色葡萄球菌 融合表达 纯化
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 食品与生物技术
• 页码范围: 20-25,32
• 页数: 7页
• 分类号: Q51
• 字数: 4777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20170125

摘要

分子质量相对小的DNA结合蛋白Sso7d可以帮助蛋白折叠,提高蛋白表达量并有助于晶体生长.为解决金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)脱水鲨烯脱氢酶(dehydrosqualene desaturase,CrtN)蛋白较难在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行可溶表达的问题,借助小分子DNA结合蛋白Sso7d,将其与CrtN基因通过重叠PCR(Overlapping PCR)连接起来,连至pET-46 Ek/LIC载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行带有6-His标签的融合表达.通过核酸电泳及序列测定进而确定所连接基因的正确性,经Ni-NTA亲和层析与凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blot)对目的蛋白进行确证.通过对CrtN-Sso7d以及Sso7d-CrtN进行分析比较,发现CrtN-Sso7d的表达量较高且能得到较多高纯度蛋白,这将被用来进行后续蛋白结晶和结构解析工作.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘卫东	中国科学院天津工业生物技术研究所	169	5202	42.0	68.0
2	贾士儒	天津科技大学生物工程学院	194	1848	22.0	31.0
3	郭瑞庭	中国科学院天津工业生物技术研究所	5	6	1.0	2.0
4	郑迎迎	中国科学院天津工业生物技术研究所	4	0	0.0	0.0
5	赵元蕾	天津科技大学生物工程学院	1	0	0.0	0.0