γ-氨基丁酸受体ρ2亚基重组蛋白构建及表达

• 作者: 付自醒 安欣芳 李敏 李超堃 王琪
• 来源期刊: 新乡医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: γ-氨基丁酸C型受体 ρ2亚基 原核表达 蛋白转染
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R741
• 字数: 4960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7683/xxyxyxb.2018.01.001

摘要

目的 构建γ-氨基丁酸受体ρ2(GABACR ρ2)基因的原核表达载体,诱导重组蛋白GABACR ρ2表达,转染SH-SY5Y细胞,实现GABACR ρ2亚基重组蛋白一过性表达.方法 构建重组质粒pET-ρ2-GFP-Tat;应用免疫印迹法检测GABACR ρ2表达;应用Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测GABACRρ2蛋白纯度;荧光显微镜下观察GABACR ρ2的转导作用及细胞定位.将SH-SY5Y细胞分为正常组和低氧低糖组,正常组分为正常对照组(高糖培养基培养且无蛋白转染)和正常转染组(高糖培养基培养且进行蛋白转染);低氧低糖组分为处理组(低氧低糖条件下培养)和处理转染组(低氧低糖条件下培养且进行蛋白转染);使用细胞计数试剂盒检测各组细胞活力.结果 重组质粒pET30-ρ2-Tat构建正确.纯化后的重组蛋白ρ2-Tat成功透过细胞膜转染SH-SY5Y细胞.正常对照组、正常转染组、处理组和处理转染组的细胞活力分别为(100.0±6.9)％、(89.3±3.6)％、(51.4±3.6)％和(66.1±8.5)％.正常对照组与正常转染组细胞活力比较差异无统计学意义(P＞0.05);处理组细胞活力显著低于正常对照组(P＜0.01),处理转染组细胞活力显著高于处理组(P＜0.01).结论 重组蛋白ρ2在Tat转导肽介导作用下透过细胞膜,成功建立了一过性表达重组蛋白ρ2的SH-SY5Y细胞株,为研究ρ2亚基的功能提供了新的研究方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李敏	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室	36	97	5.0	8.0
2	李超堃	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室	12	41	4.0	5.0
3	王琪	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室	2	3	1.0	1.0
12	安欣芳	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室	1	2	1.0	1.0
13	付自醒	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室	1	2	1.0	1.0