利用CRISPR/Cas9n技术生产抗蓝耳病的基因编辑克隆猪

• 作者: 丁彪 刘通 张坤 张运海 曹祖兵 王少华 罗磊 赵盼盼
• 来源期刊: 浙江大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/Cas9n系统 基因编辑 蓝耳病 CD163基因
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 157-161
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|S828
• 字数: 3502字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2018.03.013

摘要

本研究利用基于CRISPR/Cas9n系统的基因编辑技术结合体细胞核移植技术,构建了在同一载体中同时表达2条sgRNA和Cas9切刻酶以及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的质粒,瞬时转染猪的成纤维细胞.通过流式细胞仪分选获得表达GFP的细胞,继续培养GFP阳性细胞至单个细胞长成细胞克隆点,经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和DNA测序鉴定获得了对CD163基因进行编辑的细胞克隆点,阳性率高达90%(18/20).以CD163基因编辑的细胞为供体细胞进行体细胞克隆和胚胎移植,获得了2头正常存活的CD163基因编辑猪.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张运海	安徽农业大学动物科技学院	61	264	9.0	14.0
2	曹祖兵	安徽农业大学动物科技学院	4	7	2.0	2.0
3	王少华	浙江大学动物科学学院哺乳动物分子胚胎学实验室	3	11	2.0	3.0
4	赵盼盼	浙江大学动物科学学院哺乳动物分子胚胎学实验室	3	6	1.0	2.0
5	刘通	浙江大学动物科学学院哺乳动物分子胚胎学实验室	2	8	2.0	2.0
6	丁彪	安徽农业大学动物科技学院	6	20	3.0	4.0
7	罗磊	安徽农业大学动物科技学院	1	5	1.0	1.0