树鼩粪便中沙门氏菌LAMP检测方法建立及应用

• 作者: 刘城秀 孙晓梅 宋庆凯 张志成 王璇 袁园
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 沙门氏菌 环介导等温扩增 粪便样品 树鼩
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 90-97
• 页数: 8页
• 分类号: R-33
• 字数: 5128字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2018.02.016

摘要

目的 建立树鼩粪便沙门氏菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对此方法进行初步应用.方法 根据沙门氏菌种属特异性基因invA(侵袭蛋白基因A)的保守序列,设计合成特异性LAMP引物.分别设定十个反应温度即57℃ ~66℃和十个反应时间即24~42 min进行优化,并测定本方法的特异性和灵敏度;同时进行普通PCR实验,作为本方法的验证和比较.用建立的LAMP法对91份野生来源的树鼩稀便样品进行检测.结果优化反应条件选出反应温度为62℃,反应时间34 min;该方法对沙门氏菌的灵敏度可达3.36×101CFU/mL,比普通PCR方法高10~100倍;对10种树鼩来源的肠道细菌进行LAMP检测,只有沙门氏菌属的肠炎沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌检测为阳性,其余为阴性;对91份野生树鼩粪便样品进行LAMP检测,阳性检出率为20.88%;LAMP法的所有反应可在40 min内完成.结果 可通过肉眼观察颜色变化直接判定.结论 所建立的LAMP方法具有便捷、快速、灵敏、特异等特点,可用于树鼩粪便中沙门氏菌的大规模快速检测.