靶向沉默Eps8基因对人慢性髓系白血病K562细胞生物学活性的影响及其分子机制的探讨

• 作者: 宁晶璇 李玉华 贺艳杰
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Eps8基因 慢性髓系白血病 K562细胞 慢病毒介导RNA干扰技术 AKT/mTOR
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 抗白血病基础与临床
• 页码范围: 83-90
• 页数: 8页
• 分类号: R733.72
• 字数: 5635字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7534/j.issn.1009-2137.2018.01.014

摘要

目的:探索靶向沉默Eps8(表皮生长因子受体通路底物8)基因对人慢性髓系白血病K562细胞生物学活性的影响及其可能的分子机制.方法:采用慢病毒介导RNA干扰技术靶向沉默K562细胞中Eps8基因.实验分组为:空白对照(blank control)组、Eps8-shRNA靶向沉默(K562-shRNA)组和阴性对照(K562-NC)组.在荧光显微镜下观察转染效率;应用RT-PCR法和Western blot法分别从mRNA转录水平和蛋白水平验证Eps8基因沉默效率;台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞体外增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡率变化;甲基纤维素克隆形成实验验证细胞集落形成能力;Western blot法检测沉默Eps8基因后AKT/mTOR及其下游信号通路磷酸化蛋白的表达情况.结果:成功建立稳定低表达Eps8的K562细胞株(K562-shRNA)和阴性对照细胞株(K562-NC).与空白对照组和K562-NC组相比,沉默Eps8基因后K562-shRNA组细胞Eps8转录和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01);体外培养48 h后,K562-shRNA组细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);K562-shRNA组细胞凋亡率为(5.81±0.39)％,空白对照组和K562-NC组细胞凋亡率分别为(1.02±0.70)％和(1.19±0.15)％,提示K562-shRNA组细胞凋亡率与空白对照组和K562-NC组之间有显著性差异(P＜0.05),而空白对照组和K562-NC组之间没有显著性差异(P＞0.05);体外甲基纤维素半固体培养10 d后,K562-shRNA组细胞集落形成能力与空白对照组和K562-NC组相比有显著性差异(P＜0.05).沉默Eps8基因可下调K562细胞p-AKT(308)和p-AKT (473)的表达(P＜0.05),而t-AKT表达水平没有明显变化.另外,沉默Eps8基因可下调AKT下游的p-mTOR和p-PRAS40蛋白的表达(P＜0.05),而总mTOR和总PRAS40的表达水平没有明显变化.结论:利用慢病毒介导的RNA干扰技术靶向沉默Eps8基因能够抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与AKT/mTOR及其下游信号通路下调有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉华	南方医科大学珠江医院血液科	57	195	8.0	11.0
2	贺艳杰	南方医科大学珠江医院血液科	20	56	3.0	7.0
3	宁晶璇	南方医科大学珠江医院血液科	1	1	1.0	1.0