恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白自身偶联条件的优化及其聚体蛋白的制备

• 作者: 周晖国 李刚 王爱秀 陈俏丽 陈勇 高雪峰
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: Pfs25蛋白质 己二酸二酰肼 乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺 偶联
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 40-45
• 页数: 6页
• 分类号: R382.3+1
• 字数: 4093字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2018.06.007

摘要

目的 探讨影响恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白(25 kDa Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25)偶联的因素,优化Pfs25蛋白的偶联反应条件,制备具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白.方法 通过对偶联反应时Pfs25蛋白浓度、偶联反应的酸碱度、不同的缓冲液及偶联试剂添加方式的探索,考察不同反应条件对Pfs25蛋白偶联的影响.凝胶过滤层析纯化Pfs25偶联反应产物,双抗体夹心ELISA和SDS-PAGE对凝胶柱洗脱液进行检测,Western blot检测纯化的Pfs25聚体蛋白.结果 Pfs25蛋白偶联反应选择1/15 mol/L Na2 HPO4-KH2 PO4为偶联缓冲液,反应体系在pH 5.6～6.0时偶联效果更好,而Pfs25蛋白反应质量浓度为25 mg/mL时可获得最佳的Pfs25偶联效率(68.67％),凝胶过滤层析法获得Pfs25聚体蛋白,经双抗体夹心ELISA和Western blot检测,形成的Pfs25聚体蛋白保持了与Pfs25蛋白相同的抗体结合能力.结论 优化了Pfs25蛋白最佳偶联反应条件,获得具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白.在形成Pfs25聚体中,以二聚体(Pfs25)2为主要形式,兼有少量三聚体(Pfs25)3和四聚体(Pfs25)4.