用无细胞蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白的研究

• 作者: GAO Qi 坪井敬文 夏超明 曹俊 诸葛洪祥 金子修 高琪 鸟居本美
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 无细胞蛋白合成 恶性疟原虫 重组表达 免疫血清
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 816-819,823
• 页数: 5页
• 分类号: R382.3
• 字数: 4164字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.09.006

摘要

目的 探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应.方法 将目的 蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯化,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清,并用免疫斑点实验(Western blot)和免疫荧光抗体实验(IFA)检测该血清对恶性疟蛋白的特异性反应.结果 成功克隆的重组质粒能在无细胞麦芽体外蛋白合成系统中生成大小相符的GST融合蛋白,并能较好地纯化.免疫斑点实验中,用该重组蛋白制备的免疫血清能检测到重组蛋白和恶性疟目标蛋白,免疫荧光抗体实验显示该免疫血清能成功地标记恶性疟目标蛋白所在部位.结论 无细胞麦芽体外蛋白合成系统可应用于恶性疟原虫蛋白的重组表达,获得的免疫血清能特异性识别疟原虫蛋白.