恶性疟原虫海南FCC1/HN株环子孢子蛋白(CSP)基因的克隆与表达

• 作者: 余新炳 刘彦文 徐劲 方建民 罗树红
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫 环子孢子蛋白 克隆 表达 疟疾疫苗
• 年，卷（期）: 2000,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-11
• 页数: 4页
• 分类号: R382.3+1
• 字数: 3449字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2000.01.003

摘要

目的为疟疾疫苗的研制提供靶抗原。方法根据恶性疟原虫IMIM22株7G8克隆环子孢子蛋白基因编码区序列，设计一对引物，采用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中特异扩增CSP基因的Ⅰ区、中央重复区和Ⅱ区片段，全长1.08kb；纯化扩增产物用HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切后，定向克隆入pcDNA3载体，转化大肠杆菌TG1株，重组克隆经筛选后，用PCR扩增和HindⅢ+BamH Ⅰ双酶切进行鉴定：用磷酸钙贴壁细胞转化法将重组质粒pcDNA-CSP导入HeLa细胞，用G418筛选出稳定分泌CSP抗原的阳性细胞克隆；将阳性细胞克隆系扩大培养并用G418加压，以表达重组CSP，分离细胞培养上清和培养细胞，进行SDS-PAGE分析。结果 (1)从FCC1/HN株基因组DNA中特异扩增出CSP基因Ⅰ区，中央重复区和Ⅱ区编码序列；(2)将扩增的目的片段正向插入pcDNA3HindⅢ和BamHⅠ位点；(3)在人宫颈癌细胞系HeLa细胞中表达重组CSP抗原，其分子量为38.3kDa，蛋白扫描分析表达量占细胞培养上清液中蛋白总含量的15.77％。结论成功构建真核表达系统pcDNA3-CSP/HeLa；建立稳定分泌CSP抗原的HeLa细胞克隆系，为进一步研究表达蛋白的免疫原性和保护性奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山医科大学寄生虫学教研室	101	467	11.0	17.0
2	徐劲	中山医科大学寄生虫学教研室	29	99	6.0	9.0
3	刘彦文	中山医科大学寄生虫学教研室	11	51	5.0	7.0
4	方建民	中山医科大学寄生虫学教研室	12	27	2.0	5.0
5	罗树红	中山医科大学寄生虫学教研室	10	17	2.0	3.0