屋尘螨变应原Der p9基因的克隆表达、纯化及反应原性鉴定

• 作者: 刘志刚 刘晓宇 常可欣 李平 李诞 杨礼腾 黄娜娜
• 来源期刊: 南昌大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 屋尘螨 Derp9 表达 纯化 反应原性
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1-4,10
• 页数: 5页
• 分类号: R446.6
• 字数: 2997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13764/j.cnki.ncdm.2018.06.001

摘要

目的 克隆表达及纯化屋尘螨第九组变应原(Der p9)蛋白,并鉴定其反应原性.方法 提取屋尘螨总RNA,通过RT-PCR克隆Der P9基因,并连接到pET-32a表达载体上,得到的重组质粒pET-32a-Der p9转化至E.Coli BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白;通过West-ern blotting等方法检测Der p9重组蛋白的反应原性.结果Der p9基因片段大小约为850 bp,其基因片段与Gen Bank公布的Der p9基因(登录号为AAP57077.1)同源性为81.94％;重组Der p9在BL21(DE3)中可高效表达,分子质量约为47 kDa,表达后的重组蛋白主要以包涵体的形式存在.Der p9重组蛋白与屋尘螨过敏患者血清呈阳性反应,具有反应原性.结论成功克隆并表达出Der p9,通过纯化获得较强反应原性的Der p9重组蛋白,为尘螨过敏性疾病诊断及免疫治疗奠定理论基础.