摘要:
目的 研究红景天苷对氨基糖苷类药物耳毒性的抑制作用,并探讨NRF2/ARE途径的作用机制.方法 出生4天的Wistar大鼠耳蜗基底膜,随机分为4组.正常培养的耳蜗基底膜为对照组;0.2 mmol/L的庆大霉素(gentamin,GM)作用24 h为模型组;400μmol/L的红景天苷(salidroside,SA)预处理培养耳蜗基底膜3 h后加GM作用24 h为干预组;400μmol/L的SA作用24 h为红景天苷组.在培养终止后分别检测耳蜗组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和还原型谷胱甘肽(glutatione,GSH)活性.Phalloidin染色观察内外毛细胞数目的变化,实时定量PCR法检测NRF2、血红素加氧酶-1(home oxygenase,HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶1(NAD(P)H dehydrogenase quinone1,NQO1)mRNA表达量.结果 (1)GM作用24 h出现毛细胞缺失,计数中底回外毛细胞缺失率为(38.6±8.92)%,内毛细胞缺失率为(41.5±6.42)%.SA预处理组内外毛细胞缺失率分别为(9.76±3.34)%和(11.38±7.14)%,与GM作用组相比毛细胞存活明显增加(P<0.01).(2)分别在GM作用耳蜗后6、12和24 h时间点检测MDA、SOD和GSH,结果显示,MDA含量在GM作用后6 h升高,12 h达到峰值,24 h略降低,但仍高于对照组.SOD活性和GSH活性在GM作用后开始下降,呈时间依赖性.SA预处理可以明显增加SOD活性和GSH活性,降低MDA含量.与GM作用组相比有统计学差异(P<0.01).(3)RT-PCR结果显示,NRF2及其下游调控因子HO-1和NQO1,在加入庆大霉素后比正常组升高,单纯SA组和SA干预组表达量更高.结论 SA通过激活NRF2/ARE途径促进下游相关联靶蛋白转录合成,从而发挥抗氧化作用,减轻GM诱导的耳蜗毛细胞损伤.