人线粒体转录终止因子3基因RNA干扰表达载体的构建筛选与干扰效果评价

• 作者: 余敏 孙美涛 杨勇琴 梅雯 熊伟 王唯斯 自加吉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 线粒体转录终止因子3 载体构建 HeLa细胞
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 64-70
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4522字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.01.013

摘要

目的:构建人线粒体转录终止因子3(MTERF3)基因的短发夹RNA(shRNA)干扰表达载体,并在mRNA和蛋白质水平对其干扰效率进行验证,以检测和筛选出干扰效率最优的shRNA表达载体.方法:根据人MTERF3基因全长cDNA序列,利用Oligoengine在线软件设计4个shRNA序列,合成4条互补寡核苷酸链,退火成双链后克隆至psi-U6.1载体,得到4个重组干扰质粒psi-MTERF3-1～psi-MTERF3-4,并通过PCR和DNA测序对其进行鉴定;将重组干扰质粒利用脂质体介导瞬时转染HeLa细胞,转染48 h后采用real time RT-PCR检测4个干扰质粒对MTERF3mRNA表达水平的影响,采用Western印迹检测其对MTERF3蛋白表达水平的情况,并筛选出最有效的shRNA干扰质粒.结果:PCR鉴定和DNA测序鉴定证实重组质粒中已插入目的DNA序列;real time RT-PCR和Western印迹结果表明4个重组载体均可以显著降低人MTERF3基因mRNA和蛋白质的表达水平(P＜0.05),其中以pSi-MTERF3-4的干扰效率最优,对MTERF3 mRNA表达的抑制率为70.1％,对MTERF3蛋白表达的抑制率为72.2％.结论:在人宫颈癌HeLa细胞系筛选出有效干扰MTERF3基因表达的shRNA序列,构建了针对MTERF3基因的RNA干扰真核表达载体且能够有效抑制目的基因的表达,为进一步研究人MTERF3在宫颈癌发生发展中的作用机制提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余敏	云南大学生命科学学院	32	106	6.0	9.0
2	熊伟	大理大学基础医学院	54	97	6.0	8.0
3	孙美涛	大理大学基础医学院	27	57	4.0	6.0
4	梅雯	大理大学基础医学院	26	43	3.0	6.0
5	自加吉	大理大学基础医学院	27	28	2.0	4.0
6	杨勇琴	大理大学基础医学院	24	62	5.0	7.0
7	王唯斯	大理大学基础医学院	23	8	2.0	2.0