RNA干扰Twist基因真核表达载体的构建与筛选

• 作者: 沈彬 王春喜 管旌旌 胡敬海
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 质粒 表达载体 短发卡样RNA Twist基因
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 59-63
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建编码Twist mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体.方法:以Twist mRNA编码区中第777位和第845位序列作为RNA干扰靶点,分别构建2个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,构建后通过PCR酶切电泳和质粒测序进行鉴定.经鉴定后分别转染稳定表达Twist基因的膀胱癌T24细胞,RT-PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果.结果:构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出400 bp的目的条带,插入片段测序结果与合成的shRNA结果一致.靶向Twist基因的shRNA对膀胱癌T24细胞中Twist基因mRNA抑制率为90%,蛋白质抑制率为86%,两种干扰质粒中shRNA1干扰效果最明显.结论:成功构建了靶向Twist基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGenesil-shRNA1质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王春喜	吉林大学第一医院泌尿外科	104	500	11.0	16.0
2	管旌旌	吉林大学第一医院泌尿外科	45	199	7.0	11.0
3	胡敬海	吉林大学第一医院泌尿外科	19	85	5.0	8.0
4	沈彬	吉林大学第一医院泌尿外科	6	16	3.0	3.0