猪链球菌Ide通用截短蛋白原核表达及纯化研究

• 作者: 曲光刚 李书光 李茂峰 武曰星 沈志强 王长江 金婷婷 韩文瑜
• 来源期刊: 中国兽药杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 猪链球菌2型 IgM裂解酶 原核表达 SDS-PAGE分析
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 微生物与免疫
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 字数: 4076字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11751/ISSN.1002-1280.2018.06.02

摘要

为利用大肠埃希菌表达猪链球菌Ide通用截短蛋白,通过对GenBank公布的IdeS蛋白家族基因同源性分析,使用Primer 5.0软件设计一对特异性引物,以猪链球菌2型强毒株JZLQ全基因组为模板,采用PCR方法扩增Ide基因截短片段,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将目的片段分别克隆到pET28a、pET32a和pET-sumo表达载体上,分别转化宿主菌E.coli BL21(DE3).通过优化诱导温度及诱导剂IPTG浓度进行表达并对表达产物进行SDS-PAGE分析.结果显示,PCR扩增片段大小约为1200 bp,经双酶切和测序验证构建正确;三种重组表达载体转化大肠埃希菌后均有目的蛋白表达,但不同表达条件下目的蛋白表达量存在差异,其中pET28a-TrIde重组表达载体用25℃诱导、IPTG终浓度为1 mmol/L时可实现重组蛋白的高效可溶性表达,为IdeSsuis蛋白在猪链球菌通用疫苗研发方面的研究奠定了基础.