巴马小型猪内源性反转录病毒感染对HEK293细胞周期调控相关基因mRNA表达的影响

• 作者: 刘金凤 吴健敏 唐海波 白安斌 覃绍敏 钟华 陈凤莲 马玲
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪内源性反转录病毒 细胞模型 荧光定量PCR 基因表达分析
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 433-441
• 页数: 9页
• 分类号: S852.69
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.03.01

摘要

以巴马小型猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)感染HEK293细胞模型(PERV-BM-HEK293)为研究对象,分析PERV整合对HEK293细胞活性的影响,同时建立7种与人细胞增殖和周期调控密切相关基因的实时荧光定量PCR(q-PCR)检测方法,并对细胞感染模型中7个基因的mRNA表达情况进行分析.细胞活力分析结果显示,随着培养代次及培养时间增加,相对于母源HEK293细胞PERV感染模型的细胞活力下降;q-PCR检测方法建立结果显示,所构建的cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、c-myc、p53、p16基因检测方法检测各基因在1.0×101～1.0×109 copies/μL反应范围内有很好的线性关系,扩增产物熔解曲线只出现特异性单峰,各组内变异系数在0.31％～2.01％之间,组间变异系数在0.46％～2.19％之间,重复性好,可稳定地用于相关基因mRNA的定量检测.用建立的q-PCR检测方法对PERV感染模型进行细胞周期调控相关基因mRNA表达分析,结果显示,与母源细胞相比,模型细胞cyclinD1、CDK1、CDK4、k-ras、p53和p16基因的mRNA表达无明显变化,原癌基因c-myc基因表达下调,提示PERV感染可能抑制c-myc基因表达.该研究结果可为评价巴马小型猪来源PERV在人-猪异种移植中生物安全性提供参考.