免疫荧光法检测杆状病毒滴度的建立及验证

• 作者: 吴清胜 姚春萍 张占东 张逸驰 李媛媛
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 杆状病毒 病毒滴度 间接免疫荧光方法
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 检测技术
• 页码范围: 702-709
• 页数: 8页
• 字数: 5111字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2018.09.009

摘要

目的 建立并优化生产用重组杆状病毒滴度间接免疫荧光检测方法,并进行初步验证.方法 将96孔板贴壁培养的SF9细胞,接种杆状病毒溶液共孵育一定时间后间接免疫荧光法显色.通过对细胞使用浓度、孵育时间及优化显色处理条件(固定液、封闭液、抗体种类及使用条件),建立杆状病毒滴度间接免疫荧光检测方法,进行特异性、准确性、重复性和中间精密度验证,并与杆状病毒滴度酶联检测试剂盒检测结果进行比较.结果 细胞使用浓度为0.6×106个/ml、共孵育时间为3d;显色条件优化后确定了冰冻甲醛-丙酮溶液为最适固定溶液和5％的山羊血清封闭液,一抗和二抗稀释比例均为1:200、37℃温育1 h时显色效果最佳.用该方法检测不同样品,仅杆状病毒组出现特异性荧光斑点.本方法与试剂盒酶联法检测结果趋势相同,其线性相关系数R2=0.996,表明两种方法具有良好的正相关性;重复性及中间精密度验证结果的变异系数CV均<10％.结论 建立了重组杆状病毒滴度的间接免疫荧光检测方法,该方法具有良好的特异性、准确性、重复性和中间精密度,可用于生产中病毒滴度的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李媛媛	北京生物制品研究所有限责任公司第七研究室	14	15	2.0	3.0
2	张占东	北京生物制品研究所有限责任公司第七研究室	4	4	1.0	1.0
3	吴清胜	北京生物制品研究所有限责任公司第七研究室	5	3	1.0	1.0
4	姚春萍	北京生物制品研究所有限责任公司第七研究室	1	1	1.0	1.0
5	张逸驰	北京生物制品研究所有限责任公司第七研究室	1	1	1.0	1.0