荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究

• 作者: 吕建新 孟哲峰 彭颖 沈波
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光定量PCR 重组病毒鉴定 病毒滴度
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 853-855
• 页数: 3页
• 分类号: R699.2|R373
• 字数: 2574字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测.方法:利用Bac-to-Bac载体系统在E.coli菌株DH10 Bac中构建重组杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)和在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒,纯化的重组Bacmid作为PCR检测的标准模板,由昆虫细胞中收获的病毒母液用于空斑测定和病毒DNA提取.以10倍梯度稀释的重组Bacmid作为标准模板,进行荧光定量PCR扩增IL18基因片段并绘制标准曲线,然后以提取的重组杆状病毒DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR反应检测.同时,以琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果:成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101～108拷贝,病毒母液的DNA拷贝浓度(vg/ml)值约为空斑检测的滴度pfu/ml值的10倍.结论:荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒,并在较大的线性范围内检测重组杆状病毒滴度,较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭颖	温州医学院细胞与分子医学研究所	29	167	7.0	12.0
2	吕建新	温州医学院细胞与分子医学研究所	153	1535	21.0	32.0
3	沈波	浙江省台州医院检验科	35	223	7.0	14.0
4	孟哲峰	温州医学院细胞与分子医学研究所	4	22	3.0	4.0