荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究

• 作者: 孟哲峰 童夏生
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光定量PCR 重组病毒鉴定 病毒滴度
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1623-1626
• 页数: 4页
• 分类号: R363
• 字数: 1424字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测.方法:利用Bac-to-Bac载体系统在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒,收获的病毒母液以10倍梯度系列稀释后,提取病毒基因组DNA.以10倍梯度稀释的重组杆状病毒穿梭质粒(bacmid)作为标准模板,进行荧光定量PCR反应扩增IL-18基因片段并绘制标准曲线,然后以上述的重组杆状病毒基因组DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR反应检测,同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果:成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101-108拷贝,病毒母液的DNA拷贝浓度(vg/mL)值约为空斑检测的滴度pfu/mL值的10倍.结论:荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒,并在较大的线形范围内检测重组杆状病毒滴度,较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟哲峰		2	8	2.0	2.0