流产衣原体荧光定量PCR方法的建立及小鼠感染菌体载量测定

• 作者: 周继章 娄忠子 张志君 李兆才
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: Balb/c小鼠 流产衣原体 实时荧光定量PCR 绿色荧光染料
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 224-229
• 页数: 6页
• 分类号: R374
• 字数: 4008字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2018.00.023

摘要

目的 建立荧光定量PCR (qPCR)对流产衣原体的检测方法.在流产衣原体灭活疫苗的生产中,代替具有主观判断影响的涂片染色疫苗效价检测方法.方法 根据流产衣原体富含半胱氨酸的胞质蛋白(envB)基因保守序列设计特异性引物,利用 EnvB-PMD19T阳性质粒为参考标准品,优化了反应条件,进行了敏感性、特异性及重复性试验,检测了感染流产衣原体小鼠的菌体载量.结果 以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1×102copies/μL~1×106copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为97%.灵敏度试验表明,该检测方法的最低检出限低至10 copies/μL.组内、组间重复性试验的变异系数均小于2 %,具有良好的重复性和稳定性.消化道检测到的菌体载量高于腹腔注射的菌体载量.结论 本研究建立的方法能够有效的检测小鼠相应脏器的菌体含量,为流产衣原体灭活疫苗的效检提供可靠的检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周继章	中国农业科学院兰州兽医研究所	28	198	8.0	13.0
2	张志君	中国农业科学院兰州兽医研究所	1	2	1.0	1.0
3	李兆才	中国农业科学院兰州兽医研究所	3	4	2.0	2.0
4	娄忠子	中国农业科学院兰州兽医研究所	5	4	2.0	2.0