sikFBA4基因启动子的克隆及低温表达模式分析

• 作者: 张尧 李忠晴 王爱英 祝建波
• 来源期刊: 草业学报
• 关键词: 天山雪莲 sikFBA4 高效热不对称PCR 启动子 GUS
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 199-207
• 页数: 9页
• 字数: 7179字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11686/cyxb2017527

摘要

天山雪莲生长于常年积雪覆盖高海拔处的高山区域,具有很强的极端低温生境适应能力,属于研究植物低温适应的良好模式植物.前期的研究表明,sikFBA4基因可以显著提高番茄的抗寒能力.为进一步研究sikFBA4基因的耐寒响应模式,以天山雪莲为材料,采用实时荧光定量PCR分析sikFBA4在低温胁迫下的表达模式;利用高效热不对称PCR法(Hi-Tail PCR)克隆sikFBA4启动子序列并进行生物信息学分析.为分析PsikFBA4序列克隆的完整性及转录表达特性,将PsikFBA4与GUS基因融合在烟草中进行瞬时表达.结果表明,sikFBA4在低温胁迫条件下的表达发生瞬时显著上调,并在1h达到峰值,而后表达下调.通过启动子克隆分析,在PsikFBA4序列-1648 bp位置处具有冷响应元件LTRE;进一步的GUS染色和酶活力测定结果表明,低温能够显著提高GUS基因的表达活性,说明sikFBA4属于低温诱导型基因.SikFBA4基因启动子的克隆、序列分析以及表达分析,为进一步探究雪莲果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(sikFBAs)基因的表达与调控机制奠定了基础.