人PGK1基因真核表达载体的构建及其功能检测

• 作者: 刘婕 叶棋浓 王圣尧 罗沙柳
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 人PGK1基因 克隆 真核表达 乳腺癌细胞 磷酸甘油酸激酶
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 507-511
• 页数: 5页
• 分类号: R730.23|R737.9
• 字数: 3604字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2018.07.007

摘要

目的 构建带FLAG标签的人癌基因磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase1,PGK1)的真核表达载体,并验证其表达产物的生物学功能.方法 采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人PGK1基因,并将其克隆到真核载体pcDNA3.0-FLAG上,酶切鉴定和测序鉴定后,通过Western印迹检测其表达;将FLAG-PGK1载体转染乳腺癌细胞ZR75-1,利用乳酸试剂盒测定乳腺癌细胞外乳酸含量,并通过CCK8法和划痕实验测定乳腺癌细胞的生长和迁移.结果 从乳腺文库中,PCR扩增出约1260 bp DNA片段,克隆到pcDNA3.0-FLAG载体上,测序结果与目的序列一致.Western印迹检测到目的基因表达,且位置正确.乳酸含量测定结果显示,PGK1可促进细胞乳酸含量增加;细胞生长曲线结果显示,转染FLAG-PGK1的乳腺癌细胞生长较空载体生长快;细胞划痕实验表明PGK1促进细胞迁移.结论 成功构建了FLAG-PGK1的真核表达载体,其表达促进了乳腺癌细胞生长和迁移,同时也促进了乳酸的增加,为进一步研究PGK1在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶棋浓	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	6	1	1.0	1.0
2	刘婕	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	7	1	1.0	1.0
3	王圣尧	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	3	0	0.0	0.0
7	罗沙柳	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0