人RhoB基因真核表达载体的构建和表达分析

• 作者: 徐莹莹 牛精铃 王梅林 蔡晶晶 金若其 陈群力
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: RhoB 真核表达 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 174-179
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0213

摘要

旨在构建带Flag标签的人RhoB基因真核表达载体并检测其表达.提取人胚肾细胞HEK-293T总RNA并反转录获得cDNA;设计引物并利用PCR技术扩增RhoB基因的ORF序列;将所扩增序列插入到带Flag标签的pCMV5真核表达载体,插入位点位于限制性内切酶SalⅠ和XbaⅠ之间,得到真核表达载体Flag-RhoB.酶切并测序验证该质粒的准确性.将成功构建的Flag-RhoB质粒转染乳腺癌MCF7细胞、宫颈癌HeLa细胞以及结直肠癌HCT116细胞,Western Blotting检测RhoB蛋白的表达情况;转染Mv.1.Lu细胞,免疫荧光技术检测该蛋白在细胞中的定位情况.成功扩增出RhoB基因的ORF序列;连入pCMV5中获得真核表达质粒Flag-RhoB;酶切鉴定得到590 bp大小的片段,测序结果显示连入的是RhoB基因的cDNA序列与GenBank相符.Western Blotting结果显示,该质粒可在MCF7细胞、HeLa细胞及HCT116细胞中正确表达.免疫荧光实验显示过表达的RhoB蛋白主要定位于细胞膜上,细胞质中也有分布.成功构建了带Flag标签的人RhoB基因的真核表达载体,该质粒可在细胞中顺利表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王梅林	河南科技大学医学院	5	10	2.0	3.0
2	陈群力	河南科技大学医学院	23	159	7.0	12.0
3	牛精铃	河南科技大学医学院	2	3	1.0	1.0
4	金若其	河南科技大学医学院	1	0	0.0	0.0
5	徐莹莹	河南科技大学医学院	2	0	0.0	0.0
6	蔡晶晶	河南科技大学医学院	1	0	0.0	0.0