沙门菌LAMP可视化检测方法的建立与应用

• 作者: 任艳 刘志科 吴文星 张洁 徐明国 徐锦凤 曹旭东 杨宁宁 石峰 荆明龙 陈创夫
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 沙门菌 invA基因 环介导等温扩增技术 可视化检测
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 10-18
• 页数: 9页
• 分类号: S852.612
• 字数: 7381字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.03.003

摘要

建立沙门菌病原体的一种可目视化环介导等温扩增技术(LAMP),实现对沙门菌的高效快捷检测.针对沙门菌的invA基因的高度保守区域,设计一套特异性引物,优化 LAMP 扩增反应体系和条件,并对该方法的特异性、灵敏性和人工污染样品以及临床样品分别进行检测.与传统的细菌分离与鉴定、PCR和real-time PCR方法进行敏感性比较.该方法优化后的最佳反应体系为内外引物浓度比例为3:1, dNTPs为2.5 μL,MgSO4为1.5 μL,2.5 μL甜菜碱(10 mol/L),1 μL Bst 2.0 DNA聚合酶,在62℃恒温条件下反应50 min,可以特异性检出沙门菌,而对其他非沙门菌病原的检测结果为阴性.该方法的最低检测线为1.0×102CFU/mL,灵敏度是常规PCR 检测方法的1000倍,与 real-time PCR 方法的灵敏度基本接近;针对人工污染沙门菌的鱼粉其检测灵敏度为5.0×102CFU/mL;对临床样品的检出率为65.4%,与传统检测方法的检出率一致.本研究建立的LAMP检测沙门菌的方法特异性强、灵敏度高、操作简便、效能高和可视化,为基层监管部门和畜牧兽医工作者对于沙门菌病原的监控和初步筛选提供了技术保障.