口蹄疫病毒通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘梅芬 张煜 王东方 王华俊 王淑娟 班付国 谢彩华 赵雪丽 闫若潜 马震原
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 二重实时荧光RT-PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 70-74
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2018.12.018

摘要

为建立一种快速、敏感、特异的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)分型鉴别诊断实时荧光RT-PCR (Fluorescence quantitative,FQ-PCR)检测方法,根据O、A、Asia Ⅰ三种血清型FMDV保守基因序列,设计能够检测到FMDV的特异性通用检测引物和A型检测引物,以及不同荧光素标记的MGB探针.通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV通用型和A型二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法,对123份疑似FMDV感染的临床样品进行了检测.结果显示,建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法在101～107拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV-T和pGEM-T/FMDV-A重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;自123份疑似FMDV感染样品中,检出10份FMDV-T阳性,6份FMDV-T/FMDV-A双阳性并且与基因测序结果一致.结果表明,本研究建立的FMDV通用型、A型二重实时荧光RT-PCR检测方法重复性好、敏感性高、特异性强,最低检测模板浓度为10拷贝/μL,可用于FMDV的快速分型检测,为FMDV的早期检测及临床诊断提供了新方法.