激活型人源化抗人CD137单克隆抗体的研制与生物学活性鉴定

• 作者: 何妍 徐依云 杨焕凤 王华菁 陆婷 黄勇
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: CD137 单克隆抗体 T细胞激活
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1332-1337
• 页数: 6页
• 分类号: R819
• 字数: 4814字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.09.003

摘要

目的 制备鼠抗人CD137抗体,并对该抗体进行人源化改造.方法 构建hCD137-pCDNA3.4真核表达质粒,经293F细胞表达纯化及鉴定后,获得CD137蛋白.制备pHAGE-CMV-MCS-IRES-ZsGreen-hCD137的慢病毒,感染HEK-293FT细胞,获得用来筛选杂交瘤的CD137转基因细胞株.将CD137蛋白免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价,将免疫小鼠的脾脏和骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用ELISA方法及流式细胞术对小鼠杂交瘤进行筛选.将筛选后的杂交瘤细胞接种小鼠,获得腹水.对抗体亚型和抗体效价进行测定,并通过竞争结合抑制实验等方法对所获的CD137单抗的生物学特性进行分析鉴定.提取该mAb杂交瘤细胞株的总RNA逆转录成cDNA,进行鼠抗人CD137抗体可变区序列克隆,构建人源化抗体重链和轻链表达载体,瞬时转染HEK-293FT,检测分析各重组人源化抗体与抗原的亲和力.结果 获得1株CD137单抗(6F5),该抗体与CD137L有竞争作用.蛋白结合表位在A.A 30-100.6F5能够激活NF-κB信号通路,对外周血单个核细胞增殖具有显著促进作用,且人源化后抗体的亲和力不变.结论 成功制备1株CD137人源化抗体,该人源化抗体为下一步开展体内肿瘤治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王华菁		4	25	3.0	4.0
3	何妍		1	0	0.0	0.0
9	陆婷		1	0	0.0	0.0
10	徐依云		1	0	0.0	0.0
11	黄勇		1	0	0.0	0.0
12	杨焕凤		1	0	0.0	0.0